1、原理：凝膠過濾層析又稱凝膠排阻色譜,分子篩色譜法,凝膠過濾法等。利用凝膠過濾介質(zhì)為固定相，根據(jù)物料中溶質(zhì)相對分子質(zhì)量的差異的液相色譜法。

 

2、特點(diǎn)：（1）操作方便,條件溫和,不會(huì)使物質(zhì)變性；（2）色譜介質(zhì)不需再生,可反復(fù)便用。（3）分離效率高，回收率較高。（4）廣泛應(yīng)用于生物大分子的初級分離，脫鹽等。（5）分辨率較低，需采用細(xì)長柱。（6）經(jīng)過凝膠過濾色譜后樣品被稀釋，上樣前需進(jìn)行濃縮。

 

二、凝膠過濾色譜的凝膠特性參數(shù)及其具體含義

 

(1)排阻極限(exclusionlimit)是指不能擴(kuò)散到凝膠基質(zhì)內(nèi)部中去的小分子的分子量。(SephadexG-50的排阻極限是30kDa）。

 

(2)分級范圍(Fractionationrange)它指出了當(dāng)溶液通過凝膠柱時(shí),能夠?yàn)榻橘|(zhì)阻滯并且分離的溶質(zhì)分子量范圍(SephadexG-50,它的分級范圍為1500—30000)。

 

(3)吸水量(Waterregains)1g干凝膠所吸收的水分稱為吸水量（SephadexG-50的吸水量為5.0±0.3g）。溶脹率=吸水量×100%。

 

(4)凝膠粒徑凝膠顆粒一般為球形，其粒徑大小對分離度有重要影響（粒徑越小，其分離效率越高）。100-200目(50-150μm)。

 

(5)床體積(Bedvolume)表示1g干膠在溶脹后所具有的后體積(SephadexG-50的床體積為9—11ml/g干凝膠)。

 

(6)空隙體積(Voidvolume)表示填充柱中凝膠粒子周圍的總空間即V0(用平均分子量為2000kDa藍(lán)色葡聚糖測出)。

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